珈創生物 —— 生物技術服務與研發為一體的高新技術企業
優質高效透明
High quality, efficient and transparent
1、服務信息（簡介）
珈創生物病毒清除工藝驗證技術服務，為客戶提供定制的病毒清除工藝驗證服務，通過 Q-PCR 或感染性實驗對工藝處理前后樣品進行病毒檢測和滴度分析，驗證客戶下游工藝對病毒的去除/滅活效果。
珈創生物擁有經過國家法檢認定的 BSL-2 實驗室，珈創生物病毒清除工藝驗證具備CMA及CNAS雙認證；實驗室配套多臺生物安全柜、AKTA 純化儀、納濾過濾設備、超速離心機等設備，可開展低 pH 孵育、熱處理/巴氏消毒、S/D 處理、柱層析（親和層析、陰離子交換層析和疏水層析等）和納米膜過濾等多種工藝的病毒清除工藝驗證。行業經驗豐富，累計完成數百起病毒清除工藝驗證項目。
珈創生物病毒清除工藝驗證平臺團隊負責人為武漢大學微生物學博士，具備豐富的病毒學、細胞生物學和微生物學基礎和科研經歷，多年專注于細胞檢測和病毒清除工藝驗證項目開展和優化。專業團隊擁有十年以上的從業經驗，通過不斷優化技術體系，提高指示病毒滴度和純度以滿足法規和客戶的需求。團隊核心成員具有扎實的生物醫學、藥學等相關專業背景，具備5 年以上的病毒清除工藝驗證從業經驗。
近年來，珈創生物已向國內數百家生物藥企業提供國內外病毒清除工藝驗證技術服務，兼顧國內與國外的法規要求差異，根據客戶需求，提供全面合理的驗證方案，并提供權威的檢測報告，為企業在工藝開發、新藥臨床試驗申報（IND）及生物制品許可申請（BLA）保駕護航，取得了良好的社會效益和經濟效益。
2、法規依據
《生物制品病毒安全性控制》中華人民共和國藥典，2020年版，三部，生物制品通則
《血液制品去除/滅活病毒技術方法及驗證指導原則》國藥監注[2002]160號
《生物組織提取制品和真核細胞表達制品的病毒安全性評價技術審評一般原則》國家食品藥品監督管理局編號：[S]GPH3-1，2005 年 12 月
《動物源性醫療器械病毒滅活/去除有效性驗證的原則》國家食品藥品監督管理局關于發布動物源性醫療器械注冊技術審查指導原則的通告（2017 年第 224 號）
Viral Safety Evaluation of Biotechnology Products Derived From Cell Lines of Human or Animal Origin. 1999. ICH Q5A（R1）
Design, Evaluation, and Characterization of Viral Clearance Procedure.2016. USP General Chapter: <1050.1>
3、 指示病毒選擇
指示病毒可分為“相關”病毒（如人血液制品可能攜帶的人類病毒 HAV、HBV、HIV 和 B19 等）、特異“模型”病毒（如 CHO 表達系統的 MVM、x-MuLV 病毒，桿狀病毒表達系統的 BV 病毒等）和非特異“模型”病毒（如 CHO 表達系統的 PRV 和 Reo3 病毒）三類，應優先選擇與潛在污染病毒密切相關的病毒，如相關病毒不能獲取或不適于體外培養，可采用特異“模型”病毒代替。
評價病毒清除的總能力時，應選擇具有不同特性的非特異性模型病毒，包括 DNA/RNA、有/無包膜、顆粒大小、尤其對物理/化學處理明顯耐受的病毒等指示病毒需有足夠高的滴度，同時所選指示病毒不能對操作人員和環境造成生物危害。
驗證平臺擁有豐富的病毒毒種毒株，且背景清楚，純度高，滴度可達 8~9Log10/ml。表 1 列出了 CHO 表達制品工藝驗證最常用四種指示病毒：
表 1 病毒清除工藝驗證中常用指示病毒性質
| 病毒名稱 |
病毒特性 |
檢測方法 |
病毒滴度 Log10/ml |
|
Reo3（呼腸孤病毒） |
雙鏈 RNA 病毒，無包膜，抗性中50-70nm |
TCID50 Q-PCR |
8-9 |
|
MVM（鼠細小病毒 ） |
單鏈 DNA 病毒無包膜，抗性極高
18-26nm
|
TCID50 Q-PCR |
8.5-9.5 |
| PRV(偽狂病毒) | 雙鏈 DNA 病毒有包膜，抗性中120-200nm |
TCID50 Q-PCR |
8-9 |
|
MuLv （鼠白血病病毒） |
單鏈 RNA 病毒有包膜，抗性低 80-120nm |
TCID50 Q-PCR |
7.5-8.5 |
|
BV (桿狀病毒) |
雙鏈 DNA病毒有包膜 45×275nm |
TCID50 |
8-9 |
|
POL-1 (人脊髓灰質炎I型病毒) |
單鏈 RNA 病毒無包膜，抗性中 25-30nm |
TCID50 |
8-9 |
|
VSV (水皰性口炎病毒) |
單鏈 RNA 病毒有包膜，抗性低 70×150nm |
TCID50 Q-PCR |
8-9 |
|
PPV （豬細小病毒） |
單鏈 DNA 病毒無包膜，抗性高 18-24nm |
TCID50 Q-PCR |
7.5-8.5 |
|
HAdV-5
(人腺病毒5型) |
雙鏈 DNA 病毒無包膜，抗性低
70-90nm |
TCID50 |
8.5-9.5 |
|
BPIV-3 （牛副流感病毒3型） |
單鏈 RNA 病毒有包膜，抗性低 150-200nm |
TCID50 |
8-9 |
4、病毒清除工藝驗證方案
2020 年 1 月 21 日，國家藥品監督管理局（簡稱：NMPA）發布 “國家藥監局關于適用《Q2（R1）：分析方法論證：正文和方法學》 等 11 個國際人用藥品注冊技術協調會指導原則的公告（2020 年第 7 號）”。公告明確：本公告發布之日起 6 個月后（即：2020 年 7 月 10 日）開始的藥學研究（以試驗記錄時間點為準），適用 ICH 指導原則, 其 中包含了 ICH Q5A (R1)和 Q5B。因此，目前人用單抗、蛋白藥物等生物制品的病毒清除驗證國內外適用一套標準和原則，建議的驗證方案 （CHO 表達系統）如下表所示：
表 2 目前建議的IND和BLA申報所需病毒清除工藝驗證總體方案
|
工藝 |
臨床Ι期（IND）
NMPA/EMA/UDFDA
|
臨床Ⅲ期后報產（BLA）
NMPA/EMA/UDFDA
|
|
低 pH 孵育或 S/D 處理 |
1種病毒（MuLV），重復2次實驗 |
2 種病毒（MuLV，PRV），重復2次實驗 |
|
納米膜過濾 |
2種病毒（MuLV，MVM），重復2次實驗 |
4 種病毒（MuLV，PRV，Reo3，MVM），重復2次實驗 |
|
陰離子交換層析 |
2種病毒（MuLV，MVM），重復2次實驗 |
4 種病毒（MuLV，PRV，Reo3，MVM），重復2次實驗，需評估舊填料的病毒清除能力以及病毒殘留 |
|
另外一種層析 |
可選 |
4 種病毒（MuLV，PRV，Reo3，MVM），重復2次實驗，需評估舊填料的病毒清除能力以及病毒殘留 |
病毒清除工藝驗證案例展示
珈創生物已為數百家國內外生物企業提供專業，全面合理的病毒清除工藝驗證服務；評審通過率為100%；有專業PM及時響應客戶需求，跟蹤項目進度，服務貫穿申報全程，提供合理化申報材料書寫建議等。
申報階段：IND
申報對象：國內外雙申報
工藝及結果：
|
工藝步驟 |
去除/滅活指數（log10） |
||
|
X-MuLv |
MVM |
PRV |
|
|
低pH孵育 |
≥4.30±0.14 |
/ |
≥5.20±0.07 |
|
陰離子層析 |
≥5.05±0.00 |
≥5.9±0.35 |
/ |
|
納米膜過濾 |
≥4.85±0.07 |
≥5.15±0.07 |
/ |
申報階段：BLA
申報對象：國內申報
工藝及結果：
|
工藝步驟 |
去除/滅活指數（log10） |
||||
|
X-MuLv |
MVM |
PRV |
Reo3 |
||
|
低pH孵育 |
≥5.80±0.28 |
/ |
≥5.15±0.07 |
/ |
|
|
納米膜過濾 |
≥4.95±0.00 |
≥4.55±0.00 |
≥4.30±0.14 |
≥4.15±0.07 |
|
|
親和層析 |
新填料 |
3.38±0.07 |
3.14±0.38 |
4.09±0.14 |
2.43±0.20 |
|
舊填料 |
3.48±0.07 |
3.14±0.38 |
4.09±0.51 |
2.29±0.16 |
|
|
陰離子層析 |
新填料 |
4.30±0.00 |
4.19±0.07 |
4.70±0.07 |
4.64±0.07 |
|
舊填料 |
4.35±0.00 |
4.33±0.10 |
4.66±0.29 |
4.50±0.14 |
|
