干熱處理是在(zai)制品(pin)凍(dong)干(gan)后進行的熱(re)處理。該技術處理溫度(du)為60~100℃，持續時間為30min~4d，需(xu)要加入穩(wen)定劑，防止蛋白過度(du)變性。一般，溫度(du)越高，病毒滅(mie)(mie)活(huo)時間越短。影響干(gan)熱(re)法(fa)病毒滅(mie)(mie)活(huo)效果的因素有很多，如制(zhi)品中組分(fen)/蛋白質(zhi)濃度(du)/凍干(gan)穩定劑(ji)成分(fen)和濃度(du)的差(cha)異，制(zhi)品最終容器(qi)的大(da)小/分(fen)裝(zhuang)量/凍干(gan)曲線(xian)和封口(kou)形式的差(cha)異等，因此，實(shi)際生產(chan)過程需要嚴格操作(zuo)。

巴氏(shi)消(xiao)毒法是指(zhi)在(zai)60±0.5℃的環境下，將蛋(dan)白(bai)質溶液進行連續加熱(re)處理（≥10小時），從而破壞病毒蛋(dan)白(bai)質及核酸分子(zi)結構，使(shi)其因變性而無法復制，從而失去傳染性。該(gai)方法所采用的高(gao)溫(wen)條件會(hui)使制品(pin)中蛋(dan)白產品(pin)過(guo)度變(bian)性，因此需要(yao)加入穩定劑(ji)以保護蛋(dan)白聚(ju)合及功(gong)能活性。

S/D（solvent/detergent）法是(shi)指利用有機溶劑(ji)和(he)非(fei)離(li)子表面活(huo)性劑(ji)的(de)(de)組(zu)合分解脂包(bao)膜(mo)病(bing)(bing)毒(du)的(de)(de)類(lei)(lei)脂膜(mo)，破壞(huai)脂包(bao)膜(mo)病(bing)(bing)毒(du)的(de)(de)類(lei)(lei)脂膜(mo)，類(lei)(lei)脂從病(bing)(bing)毒(du)表面脫落，使病(bing)(bing)毒(du)失(shi)去(qu)粘附和(he)感染細胞的(de)(de)能力來達到(dao)滅活(huo)病(bing)(bing)毒(du)的(de)(de)效果。

有機溶劑常用磷酸三丁酯（TNBP）；非離子表面活性劑如Triton X-100或Tween80，有報道也用Triton X-45等。S/D處理可以滅活脂包膜病毒，對非脂包膜病毒無效。

使用S/D滅活，下(xia)游必(bi)須有工(gong)藝能夠把S/D試劑(ji)去除，另外S/D試劑(ji)對動物細胞有較強(qiang)毒(du)性，會(hui)影響指示病(bing)(bing)毒(du)滴度測(ce)定檢(jian)測(ce)限，因此該工(gong)藝的(de)驗(yan)證需要盡可(ke)能提高(gao)加入指示病(bing)(bing)毒(du)的(de)初始滴度或提高(gao)病(bing)(bing)毒(du)檢(jian)測(ce)方法的(de)靈敏度。

低pH孵(fu)放法是重組蛋(dan)白(bai)藥物純化工藝(yi)中常用的關(guan)鍵步(bu)驟，其操作(zuo)過程簡單、病毒滅活效果好，其利用有脂(zhi)包(bao)膜(mo)類病毒的囊膜(mo)和(he)病毒衣殼蛋(dan)白(bai)在低pH條件下(xia)會逐漸(jian)變性而使病毒顆粒失(shi)去感(gan)染能力，從而達到病毒滅活效果。

低(di)(di)pH孵放不僅可以滅(mie)活(huo)(huo)有脂包膜(mo)(mo)類病毒，還可以沉淀HCP、DNA等(deng)雜質，對(dui)純(chun)化工藝中(zhong)的雜質去(qu)除也起到重要作用(yong)。本(ben)方法對(dui)于(yu)無脂包膜(mo)(mo)類病毒則作用(yong)微弱(ruo)，但在工藝中(zhong)的低(di)(di)pH（如pH4）處理(li)（有時(shi)(shi)加胃酶(mei)）能(neng)滅(mie)活(huo)(huo)幾種(zhong)脂包膜(mo)(mo)病毒。除此之外(wai)，病毒滅(mie)活(huo)(huo)效(xiao)果還可能(neng)受pH值、孵放時(shi)(shi)間和(he)溫度(du)(du)、胃酶(mei)含量、蛋白質濃度(du)(du)、溶質含量等(deng)因素影(ying)響，滅(mie)活(huo)(huo)效(xiao)果隨著pH升高滅(mie)活(huo)(huo)效(xiao)果降(jiang)低(di)(di)，隨著溫度(du)(du)升高滅(mie)活(huo)(huo)效(xiao)果升高。

柱層析(xi)法（也稱(cheng)色譜）根據(ju)蛋(dan)白(bai)質(zhi)的(de)理化性質(zhi)的(de)不同，進行蛋(dan)白(bai)分(fen)離純化，從而(er)有(you)效分(fen)離雜蛋(dan)白(bai)及消除病毒等污染物。柱層(ceng)析(xi)(xi)(xi)法包括親(qin)和層(ceng)析(xi)(xi)(xi)、離子交(jiao)換層(ceng)析(xi)(xi)(xi)、疏水(shui)層(ceng)析(xi)(xi)(xi)、反相(xiang)層(ceng)析(xi)(xi)(xi)等。使用親(qin)和層(ceng)析(xi)(xi)(xi)去除病毒(du)主要依靠病毒(du)在親(qin)和填料中和其(qi)他非目(mu)標蛋白的(de)雜質發酵液成分一起流穿，并且不受填料壽命的(de)影響(xiang)。

離(li)子(zi)交換層(ceng)析(xi)去(qu)除(chu)病毒的(de)(de)能(neng)力(li)主(zhu)要(yao)是以(yi)(yi)靜電作用為(wei)主(zhu)導(dao)作用，以(yi)(yi)陰離(li)子(zi)層(ceng)析(xi)（流穿模式）為(wei)例(li)，在緩沖液為(wei)中性或弱堿性（如pH8.0）條件下，病毒帶負(fu)電荷(he)，可以(yi)(yi)和填(tian)料(liao)帶正(zheng)電荷(he)的(de)(de)季銨陽離(li)子(zi)結合(he)(he)，從而(er)結合(he)(he)到(dao)層(ceng)析(xi)填(tian)料(liao)上，而(er)目(mu)的(de)(de)蛋(dan)白則流穿，最終達(da)到(dao)病毒去(qu)除(chu)的(de)(de)作用。

病(bing)毒膜過濾是利(li)用(yong)病(bing)毒和蛋白大(da)(da)小(xiao)的不同，使小(xiao)于平均(jun)孔(kong)徑的蛋白通(tong)過濾膜，將(jiang)大(da)(da)于平均(jun)孔(kong)徑的病(bing)毒截留在(zai)膜內，從而達到(dao)去除病(bing)毒的效果。

病(bing)毒(du)去(qu)(qu)除膜(mo)(mo)過(guo)濾可以(yi)同(tong)時(shi)滿足(zu)病(bing)毒(du)去(qu)(qu)除效果好、目(mu)(mu)的(de)(de)蛋(dan)白質(zhi)通過(guo)性(xing)高(回收量、過(guo)濾時(shi)間)、目(mu)(mu)的(de)(de)蛋(dan)白質(zhi)不(bu)變性(xing)的(de)(de)特(te)點(dian)，另外不(bu)管是(shi)(shi)(shi)脂包膜(mo)(mo)病(bing)毒(du)還是(shi)(shi)(shi)非脂包膜(mo)(mo)病(bing)毒(du),無(wu)論病(bing)毒(du)基(ji)因(yin)組是(shi)(shi)(shi) RNA還是(shi)(shi)(shi)DNA，基(ji)本靠孔(kong)徑大(da)小(xiao)來去(qu)(qu)除病(bing)毒(du)，所以(yi)是(shi)(shi)(shi)當前(qian)最可靠的(de)(de)病(bing)毒(du)去(qu)(qu)除技術。根據目(mu)(mu)的(de)(de)蛋(dan)白的(de)(de)大(da)小(xiao)，可以(yi)選擇平均孔(kong)徑不(bu)同(tong)的(de)(de)濾膜(mo)(mo)，其中(zhong)平均孔(kong)徑為20nm左右的(de)(de)產品被稱為細小(xiao)病(bing)毒(du)濾膜(mo)(mo)。平均孔(kong)徑 35~ 50 nm的(de)(de)濾膜(mo)(mo)被稱為逆(ni)轉錄酶(mei)病(bing)毒(du)濾膜(mo)(mo)。

根據(ju)PDA Technical Report 41，高TMP（跨(kua)膜(mo)壓差）是病毒過濾的(de)最劣條件之一。近年來(lai)的(de)報告表明，過濾過程中的(de)壓力(li)釋放以及之后的(de)再加壓會影(ying)響病毒去(qu)除效果。

不同的病毒滅活/去除工藝有著不同的優劣勢與應用領域，實際生產中，應根據潛在污染病毒的特性，結合產品特性和生產工藝、病毒清除工藝的作用機制和清除能力的綜合評估，選擇適宜的病毒清除工藝。

武(wu)漢珈創生(sheng)(sheng)物技(ji)術(shu)股份有限公(gong)司，創建于2011年，是一家集生(sheng)(sheng)物技(ji)術(shu)服務(wu)與研發為一體(ti)的(de)高新技(ji)術(shu)企業(ye)，專注于為生(sheng)(sheng)物藥品/制品的(de)生(sheng)(sheng)產企業(ye)及研發機構提供各類細(xi)胞(bao)（含(han)重組細(xi)胞(bao)、干細(xi)胞(bao)、免疫細(xi)胞(bao)等(deng)）及原輔料的(de)質量(liang)檢測、病(bing)毒清(qing)除(chu)工藝驗證技(ji)術(shu)服務(wu)。

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毒種(zhong)優質：背景清楚，純度高，滴度可(ke)達(da)8~9Log10/ml。

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